病毒的分離培養與鑒定對病毒感染的診斷、治療及流行病學調查提供科學的依據。方法大致如下：
（1）標本採集與送檢
標本採集、送檢是否正確，直接關係到診斷的陽性率與正確性，主要應注意早期留採標本及保存。絕大多數病毒只有在疾病早期才能找到，例如流感患者發病第一天在咽喉部含漱中病毒分離的陽性率最高，第二天就急劇下降，因此要在發病初留取標本（咽拭子）。病毒在室溫很容易滅活，採集的標本必須保存在低溫條件（最好低溫冰箱），送檢時可放在裝有冰塊的低溫瓶中立即送檢。
（2）病毒分離培養與鑒定方法
病毒必須在活細胞內才能增殖，故要用活細胞或組織來培養。採用的方法有動物接種、雞胚胎培養和細胞培養三種。
動物接種：這是最原始的培養方法。常用動物有小白鼠，接種途徑有鼻內、皮下及腹腔內等，可根據病毒侵襲部位來選擇適當途徑。接種後每日觀察動物發病情況，如動物死亡則取病變組織製成懸液，繼續接種動物傳代，以使病毒更大量繁殖。不發病判為陰性。
雞胚胎培養：雞胚胎對多種病毒敏感，根據病毒種類選擇接種部位，如流感病毒接種於羊膜腔和尿囊腔。接種後繼續培養孵育，以雞胚胎發生異常變化或羊水、尿囊液中出現紅細胞凝集現象等作為病毒存在或增殖的指標。
細胞培養：是目前分離病毒的主要方法。組織培養是用離體組織塊或分散的活細胞。細胞有原代細胞和傳代細胞，原代細胞用動物雞胚或引產人胚的腎、肺等組織，經胰蛋白消化後再加入營養液培養成貼壁單層細胞；傳代細胞有二倍體細胞和癌細胞。病毒在細胞培養中增殖的指標，包括有：
1.細胞變化，由病毒引起的細胞病變稱為"細胞病變效應"，不同病毒有不同的病變效應。
2.紅細胞吸附，受某些病毒感染的細胞能吸附脊椎動物的紅細胞，表現在細胞周圍吸附紅細胞的現象。
病毒數量與感染性的測定指標，包括有：
1.蝕斑（空斑）測定，將病毒懸液稀釋成不同濃度，分別接種至單層細胞培養中，覆蓋一層融化瓊脂。病毒在細胞增殖後產生局限性病灶，最終形成可見的空斑，空斑可作為定量單位（空斑形成單位（PSW）/毫升（ml））。
2.50%感染量或50%組織細胞感染量（ID50或TCID50），即測定病毒感染細胞等後，引起50%發生死亡或病變的最小量，可估計病毒感染強弱及含量，用統計學方法計算。
張景岳工作室提供
亞太中醫藥資訊網彙整
|